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雞卵清蛋白-沙丁胺醇制備方法有哪些?

2025-05-26 [23]

雞卵清蛋白-沙丁胺醇(OVA-SAL)的制備方法主要包括以下步驟,其中關鍵的偶聯(lián)方法通常為碳二亞胺法和琥珀酸酐法:

  1. 沙丁胺醇活化

    • 沙丁胺醇作為半抗原,分子量較小,免疫原性較弱,需通過化學反應引入活性官能團(如羧基)以增強其反應活性?;罨^程通常采用化學試劑,使其具備與載體蛋白結合的能力。

  2. 偶聯(lián)反應

    • 碳二亞胺法:利用碳二亞胺類化合物(如EDC)作為偶聯(lián)劑,促進沙丁胺醇與OVA之間的偶聯(lián)反應。

    • 琥珀酸酐法:通過沙丁胺醇與琥珀酸酐的醇解反應制備沙丁胺醇的琥珀酸衍生物,再用碳二亞胺法將該衍生物偶聯(lián)到OVA上。

    • 在適當?shù)臈l件下(如溫度、pH值、反應時間和反應物濃度等),將活化后的沙丁胺醇與雞卵清蛋白(OVA)進行偶聯(lián)反應。反應中需精確控制試劑濃度與反應參數(shù),確保形成穩(wěn)定的酰胺鍵等化學鍵,從而生成OVA-SAL偶聯(lián)物。

    • 常用偶聯(lián)方法

  3. 純化與鑒定

    • 反應結束后,需通過透析、凝膠過濾等方法去除未反應的小分子和雜質(zhì),獲得高純度的偶聯(lián)物。

    • 隨后利用電泳、質(zhì)譜等技術對偶聯(lián)物的分子量、偶聯(lián)比及結構進行鑒定,確保其符合預期。

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